一、现实准备细胞
选拔对数期滋长的、细胞密度达80-90%足下的肿瘤细胞。细胞状态对成瘤成果有很大影响，务必确保细胞处于邃密状态。时常每只小鼠需要两个100ml培养皿的细胞量
小鼠准备
选拔年级适中（如5-6周龄）的免疫劣势裸鼠。裸鼠由于莫得胸腺等免疫器官，免疫力险些为零，对肿瘤细胞莫得免疫作用，易于成瘤
确保小鼠健康情状邃密，无疾病症状
二、细胞集合与制备细胞消化：弃掉旧培养基麻豆，用PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞1-2次麻豆，去除细胞中的血清
使用胰酶消化细胞，待细胞变圆未脱离培养皿时，去除胰酶，加入无血清培养基制成细胞悬液
细胞悬液制备
将细胞悬液进行离心，去除上清液。用PBS或无血清培养基重悬细胞，并进行细胞计数，想到打算所需的终浓度。时常皮下瘤接种时，细胞悬液的浓度约为1-5×106个细胞
三、小鼠接种固定小鼠
用左手固定小鼠，使其处于酣畅且清爽的姿势
皮下打针：在小鼠的左侧腋窝处进行皮下打针
打针时，将针头深切皮下约1厘米，以减少打针后细胞悬液从针眼溢出的可能性。迟缓打针细胞悬液，打针体积时常为100微升
在接种经过中，应将细胞悬液遗弃在冰上，以减缓细胞凋一火
四、接种后搞定饲养不雅察：接种完成后将小鼠放回其笼中不时进行饲养。不详1周后不错不雅察到肿瘤的形成
笔据现实联想，需要按期监测肿瘤的滋长情况，如测量肿瘤的大小、纪录滋长弧线等
肿瘤搞定：笔据现实联想，在肿瘤体积达到一定大小（如不提高1000-2000mm³）之前，需要对小鼠进行安乐死
后续搞定可能包括拍照、测量体积、提真金不怕火卵白质和RNA等
五、扎眼事项细胞状态
细胞在指数滋长阶段集合特地遑急，因为细胞状态对细胞系移植后的活力有着极大的影响
小鼠选拔
选拔年级适中、免疫劣势进程符合的小鼠进行现实。年级太大或免疫劣势进程不够的小鼠可能会影响成瘤成果
打针妙技
在接种时，针头应深切皮下约1厘米，以减少打针后细胞悬液从针眼溢出的可能性
打针前一定要排去针管内的空气
监测与纪录：每天监测小鼠的存活和肿瘤
伦理问题：在进行小鼠皮下成瘤现及时，需要降服相干的伦理规范。为幸免肿瘤过度滋长对小鼠变成无用要的痛苦以上仅供参考
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